CICA-INIBIC. Procedimento de deteção de recombinação homóloga in vivo através da análise de formas de gfp recombinantes

CICA-INIBIC. Procedimento de deteção de recombinação homóloga in vivo através da análise de formas de gfp recombinantes

Descrição do Projeto

Os grupos Levagen e FENM procuram empresas interessadas em licenciar o sistema para a identificação, com microscopia de fluorescência, de rearranjos genómicos (recombinação) causados por diferentes condições. Utilizam leveduras que exprimem proteínas fluorescentes de diferentes localizações celulares.

Descrição da área de atividade / tecnologia

Esta tecnologia, no atual estado de desenvolvimento, permite identificar alterações originadas por mutações de células ou agentes químicos externos e/ou fármacos, que causam a reorganização genética, utilizando a levedura como organismo modelo e sem necessidade de qualquer tipo de processamento celular, apenas visualização por microscopia de fluorescência. Uma grande vantagem sobre os estudos que aplicam técnicas de PCR, é que aqui as células são visualizadas diretamente após a cultura, enquanto a análise de PCR requer o processamento das amostras, a própria PCR e a eletroforese.

Por outro lado, com a nossa técnica podemos identificar recombinações em células individuais que podem passar despercebidas, se a sua frequência for baixa, numa PCR com o ADN de várias células. No caso do estudo da recombinação por técnicas genéticas clássicas, é necessário detetar o crescimento celular em placas seletivas, o que implica uma perda de tempo (geralmente 2-3 dias) e de materiais de cultura.

A tecnologia é aplicável e patenteada para utilização em qualquer tipo de célula eucariótica. Por conseguinte, nestes casos não é necessário efetuar extrações de ADN ou PCR e permite também diferenciar a direção da recombinação à medida que se perde a floração citosólica ou nucleolar. Inclui duas estirpes de levedura para ter um controlo positivo e um controlo negativo nos estudos aos quais é aplicado. A tecnologia permite o desenvolvimento de um software específico de análise de imagem.